Эндонуклеаза Т7 I распознает и разрезает не полностью совпадающую ДНК, ДНК с крестообразной структурой, структуру холидея или точки бифуркации ДНК, гетерологичную ДНК; при этом фермент разрезает двухцепочечную ДНК по сайтам разреза с меньшей скоростью. Фермент расщепляет первую, вторую или третью фосфодиэфирную связь на 5'-конце сайта несовпадения. Этот продукт представляет собой высокочистый активный белок, экспрессированный и очищенный в Escherichia coli после клонирования гена рекомбинантной эндонуклеазы I Т7. Его можно использовать для обнаружения мутаций генов, SNP, TALEN или CRISPR/Cas9, идентификации несовпадающих ДНК и разрешения четырехнаправленной перекрестной ДНК или разветвленной ДНК; обнаружения гетеродимера или разреза ДНК; для случайного разрезания линейной ДНК для Shot-gun клонирования.